Indução de memória imunológica residente e controle do parasitismo hepático após vacinação com uma proteína quimérica contra a leishmaniose visceral experimental.

Abstract

Embora uma vacina profilática possa contribuir para a redução da incidência da leishmaniose visceral (LV), faltam atualmente vacinas eficazes voltadas para o uso humano ou canino. É imperativo desenvolver uma vacina eficaz e segura para uso profilático em campanhas de vacinação contra a leishmaniose visceral canina (LVC) e/ou humana (LVH), sobretudo no Brasil dada sua expansão em centros urbanos. Adicionalmente, a alta prevalência de cães infectados, porém assintomáticos, representa um desafio considerável ao controle da doença. O presente estudo avaliou o desempenho vacinal de uma proteína quimérica associada ao adjuvante Hiltonol® (Poly ICLC) quanto à sua capacidade em gerar células T de memória residente (TMR) e eficácia vacinal, no fígado, frente ao desafio experimental por Leishmania infantum em camundongos BALB/c imunizados. Para tanto, os camundongos foram divididos nos grupos controle Salina, Adjuvante (Hiltonol®), Quimera A isolada (Qui-A), e no candidato vacinal composto pela associação entre a Quimera A e o adjuvante (Qui-A/Hiltonol®). O regime de imunização consistiu em três imunizações intradérmicas, empregando microagulhas, com intervalo de quinze dias entre as doses. Posteriormente, os camundongos foram desafiados com 1×106 promastigotas de L. infantum (cepa MCAN/BR/2008/OP46), em fase estacionária de crescimento, via intravenosa. Após 45 dias do desafio experimental, os camundongos foram eutanasiados para avaliação da geração de células TMR e carga parasitária, respectivamente, por meio de citometria de fluxo multiparamétrica e PCR em tempo real (qPCR). No presente estudo, procedeu-se à caracterização fenotípica das células TMR CD4+ e TMR CD8+ específicas, com base na expressão dos marcadores CD197, CD62L, CD103 e CD69. A vacinação com Quimera A associada ao adjuvante elevou significativamente o percentual de células TMR CD4+ e TMR CD8+ . A vacinação com Quimera A isolada também levou ao aumento significativo do percentual das células TMR CD4+ em comparação aos grupos controle Salina e Adjuvante e das células TMR CD8+ em comparação apenas ao grupo controle Salina. Adicionalmente, os camundongos vacinados com a Qui-A/Hiltonol® apresentaram uma redução drástica e estatisticamente significativa de 86,9% na carga parasitária hepática. Ao correlacionar a geração das células TMR com a carga parasitária, observamos correlações negativas fortes, indicando que existe uma relação inversa e estatisticamente robusta entre percentual destas células residentes no fígado e o parasitismo no órgão. Todos esses achados sugerem que o aumento dessas populações celulares específicas pode atuar diretamente na eliminação de hepatócitos infectados, servindo como um biomarcador confiável de proteção contra a doença. Por isso, foi possível concluir que a presença de células TMR no fígado atua como um correlato de proteção determinante, diferenciando os animais protegidos daqueles infectados e não vacinados. O protocolo vacinal testado, portanto, se apresenta como promissor e profilático contra a LV, uma vez que atendeu aos requisitos e protocolos de imunogenicidade e eficácia. Por fim, ao validar a eficácia da Qui-A/Hiltonol®, este trabalho consolida as células TMR hepáticas como biomarcadores de proteção.